人上皮中性粒细胞激活肽78 ELISA检测试剂盒
产品名称： 人上皮中性粒细胞激活肽78 ELISA检测试剂盒
英文名称： Human CXCL5/ENA-78 ELISA KIT
产品编号： SEKH-0069
产品价格： 0
产品产地： 北京
品牌商标： solarbio
更新时间： 2025-01-23T11:12:46
使用范围： null
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Human CXCL5 ELISA KIT
品牌：Solarbio | 货号：SEKH-0069
7 pg/ml（灵敏度），检测范围：15.6 - 1,000 pg/ml
| 中文名称 | 人上皮中性粒细胞激活肽78检测试剂盒 |
|---|---|
| 英文名称 | Human CXCL5 ELISA KIT |
| 反应性 | Human |
| 样品类型 | Serum, plasma, Cell culture supernatant |
| 灵敏度 | 7 pg/ml |
| 检测目标 | CXCL5/ENA-78 |
| 应用 | Sandwich ELISA |
CXCL5也称上皮中性粒细胞激活肽78(ENA-78)，是趋化因子超家族的CXC亚族成员,来源于人肺Ⅱ型肺 泡上皮细胞。人CXCL5前体蛋白由114个氨基酸组成，切割掉36个氨基酸信号肽后，形成78个氨基的成熟蛋 白，蛋白分子量为8.3kDa 。 CXCL5基因定位于染色体4q13-q21，由4个外显子和3个内含子组成，与IL-8 基因结构相似。CXCL5的氨基酸序列与NAP-2(53%)、GROα，β和γ(分别为52%、48%和51%)和IL-8(22%) 具有同源性。CXCL5和受体CXCR2结合，是一种具有促血管生成作用的趋化因子，对中性粒细胞也有着趋 化作用。CXCL5参与炎症、肿瘤、自身免疫病、变态反应、AIDS等多种疾病的发生发展过程。
检测原理：
Solarbio (Solarbio ®) ELISA 试剂盒采用基于双抗体夹心法的酶联免疫吸附检测技术。将抗人 CXCL5 单 克隆抗体包被在酶标板上；分别加入梯度稀释的标准品和预稀释的样本，标准品和样本中的人 CXCL5 会与 酶标板上的包被抗体充分结合；洗板后加入生物素化抗人 CXCL5 抗体，该抗体会与板子上包被抗体捕获的 标准品和样本中的人 CXCL5 发生特异性结合；洗板后加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素，生 物素与链霉亲和素会发生高强度的非共价结合；洗板后加入显色剂底物 TMB，若反应孔中样品存在不同浓 度的人 CXCL5，则 HRP 会使无色 TMB 变成不同深浅（正相关）的蓝色物质，加入终止液后反应孔会变成 黄色；最后，在λmax=450 nm（OD=450 nm）处测定反应孔样品吸光度（OD），样本中的人 CXCL5 浓度与 OD 成正比，通过绘制标准曲线和四参数拟合软件便可计算出样本中人 CXCL5 的浓度。
注意事项：
1. 试剂盒应在有效期内使用，请不要使用过期的试剂。
2. 试剂盒未使用时应保存在 2-8℃冰箱，已复溶但未用完的标准品，请丢弃。
3. 试剂盒使用前请在室温恢复 30 min，且充分混匀试剂盒里的各种成份及制备的样品。
4. 在试验中标准品和样本建议作复孔检测，且加入试剂的顺序应保持一致。
5. 为避免交叉污染，请在试验中使用 1 次性试管，枪头，封板膜（※）及洁净塑料容器。.
6. 浓缩生物素化抗体和浓缩酶结合物的体积较少，在运输过程中微量液体会沾到管壁及瓶 盖上，使用前请离心处理（5-10 S 即可），使管壁上的液体集中在管底部，取用时，请用移液器小心吹 打几次。
7. 除了试剂盒中的浓缩洗涤液和终止液可以通用外，请不要使用其他来源试剂盒内含的 试剂代替本试剂盒中的某单个组分。
8. 为保证结果准确，每次检测均需做标准曲线。
安全提示：
试剂盒中的终止液为酸性溶液，操作人员在使用时请带上手套并注意防护；在操作过程中也要避免试 剂接触皮肤和眼睛，如果不慎接触，请用大量清水清洗；检测血液样本及其它体液样本时，请按国家生物 实验室安全防护有关管理规定执行。
自备实验器材（不提供，可代购）
1． 酶标仪（主波长 450nm，参考波长 630nm）
2． 高精度移液器及一次性吸头：0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl
3． 洗板机或洗瓶
4． 37℃孵育箱
5． 双蒸水，去离子水，量筒等
6． 稀释用聚丙烯试管
样本收集及储存：
1. 细胞培养上清： 将细胞培养基移至无菌离心管，在 4℃条件下 1000 ×g 离心 10 min,然后将上清等量分装于小 EP 管并 于-20℃下保存（24 小时内检测可放入 2-8℃储存），避免反复冻融。
2. 血清样本：室温血液自然凝固 20 min 后，在 4℃条件下 1000×g 离心 10 min，然后将上清等量分装于小 EP 管并于 -20℃下保存（24 小时内检测可放入 2-8℃储存），保存过程中如有沉淀，请再次离心，避免反复冻融。
3. 血浆样本： 将全血收集到含抗血凝剂的管中，根据标本的实际要求选择 EDTA，柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混 合 20 min，在 4℃条件下 1000×g 离心 10 min，然后将上清等量分装于小 EP 管并于-20℃下保存（24 小时内检测可放入 2-8℃储存），避免反复冻融。
※注意：
血清血浆样本避免使用溶血、高血脂样本，以免影响检测结果；如果样本中的靶标物检测浓度高 于标准品的最高值，请将样品做适当倍数稀释后检测，建议正式实验前做预实验以确定稀释倍数。
试剂准备：
1. 试剂回温：首先在实验前 30 min 将试剂盒，待测样本放置于室温下，浓缩洗涤液如出现结晶，请放入 37℃温浴直到结晶全部溶解。
2. 配制洗涤液：预先计算好稀释后的洗涤液使用体积，然后用双蒸水或去离子水将 20 倍浓缩洗涤液稀释 成 1 倍应用液，未用完的浓缩洗涤液放入 4℃冰箱保存。
3. 标准品梯度稀释：加入标准品/样本稀释液（SR1）1ml至冻干标准品中，静置15分钟待其完全溶解后轻 轻混匀(浓度为2000pg/ml)，然后在其余七管中各加入500L标准品/样本稀释液（SR1），按照以下浓度 进行2倍稀释：1000、500、250、125、62.5、31.2、15.6、0 pg/ml进行稀释。1000pg/ml标准曲线最高点 浓度，标准品/样本稀释液（SR1）作为标准曲线的零点（0pg/ml）。复溶过的标准品原液（2000pg/ml） 未用完的应废弃或根据需要按照一次用量分装，并将其贮存在-20～-80℃冰箱，具体如下图。
4. 生物素化抗体工作液：预先计算好试验所需用量，用检测稀释液（SR2）将100倍抗体浓缩液稀释成1倍 应用工作液（稀释前充分混匀），请在30分钟内加入到反应孔中。
5. 酶结合物工作液：按每次试验所需用量配制，用酶结合物稀释液（SR3）将100倍浓缩酶结合物稀释成1 倍应用工作液（稀释前离心），请在30分钟内使用。
6. 洗涤方法： 自动洗板：甩尽酶标板孔中液体，在厚迭吸水纸上拍干，注入洗涤液为 300ul/孔,注 与吸出间隔为 30 秒，洗板 5 次。 手工洗板：甩尽酶标板孔中液体，在厚迭吸水纸上拍干，用洗瓶加入洗涤液 300ul/孔，静止 30 秒后甩净酶标板孔中液体，在厚迭的吸水纸上拍干，洗板 5 次。
结果判断：
1.用酶标仪 450 nm 波长测定 OD 值。选择双波长检测，参考波长为 630 nm。如不能进行双波长检测，请 用 450 nm 的 OD 测定值减去 630 nm 的 OD 测定值。
2.计算标准品、样品的平均 OD 值：每个标准品和标本的 OD 值应减去零孔的 OD 值
3.以标准品浓度为横坐标，吸光度OD值为纵坐标，用软件绘制标准曲线，样品中CXCL5含量可通过对应OD 值由标准曲线换算出相应的浓度。
4.若标本 OD 值高于标准曲线上限，应做适当稀释后重新检测，计算浓度时再乘以稀释倍数。
2. 灵敏度：
最低可检测人 CXCL5 浓度达 8pg/ml 20 个零标准品浓度 OD 的平均值加上两个标准差，计算相应的可检测浓度。
3. 特异性：
不与人 CXCL8/IL-8、MCP-1、 MIP-1α、 MIP-1β 反应，小鼠 GM-CSF、 IL-1α、 IL-1β、 IL-3 、IL-4 、 MIP-1α 、 MIP-1β、TNF-α等反应。
4. 重复性：
板内，板间变异系数<10%。
5. 回收率：
在选取的健康人血浆、细胞培养上清中加入 3 个不同浓度水平的人 CXCL5，计算回收率。
6. 线性稀释： 分别在选取的 4 份健康人血浆和细胞培养上清中加入高浓度人 CXCL5，在标准曲线动力学范围内进行稀 释，评估线性。
